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详细分享一下SPE固相萃取的操作步骤
点击次数:74 发布时间:2018-12-19

  详细分享一下SPE固相萃取的操作步骤

  SPE固相萃取的过程要求样品以溶液存在,没有干扰,而且有足够的浓度以能被检测。

  SPE固相萃取的五步操作步骤对于反相,正相,离子交换萃取过程,一般五步全部都是需要的对于样品纯化过程只需要前三步,步骤一和步骤二如描述的一样,然而在第三步,分析物将随着样品从柱内流出被收集,干扰杂质则保留在填料上。

  步:选择合适的小柱1)如何选择合适的SPE小柱或者膜片(注建议固相萃取膜片用于大体积样品,含有大颗粒或处理时需要很高的流速的样品)大小尺寸的选择:a,SPE小柱选择如果您的样品使用小柱尺寸小于1ml 1ml1ml-250ml,不要求萃取流速3ml1ml-250ml,要求萃取流速 6ml10ml-250ml,高样品容量10ml/35ml/60ml大于1L,不要求萃取流速10ml/35ml/60mlb,SPE膜片选择如果您的样品 使用膜片的尺寸100ml-1L47mm大于1L90mm2)填料量的选择反相、正相和吸附类型的过程:

  被萃取样品的质量不超过柱内填料量的5%。换句话说,如果您用的100mg/1ml的SPE小柱,分析物的上样质量不超过5mg。离子交换过程:您必须考虑离子交换容量:SAX和SCX的吸附容量约0.2meg/g(1meg=1mmole的+1或-1带电荷物质)NH2和WCX填料的离子交换容量需要由具体的应用来决定。

  第二步:活化平衡SPE小柱萃取样品之前,活化平衡固相萃取填料,用一满管溶剂冲洗填料,对于膜片则用5-10mla,反相键合硅胶和极性吸附介质,通常用与水互溶的有机溶剂如甲醇活化,然后用水活缓冲溶液平衡。

  b,正相类型固相萃取硅胶和极性吸附介质通常用样品所在的有机溶剂来预处理。

  c,离子交换填料用于非极性有机溶剂中的样品时,采用样品溶剂来预处理。对于极性溶剂中的样品,用水溶性有机溶剂来活化,在用一定的PH,有机溶剂含量和盐浓度的水溶液平衡。

  第三步:上样用移液管或者微量吸液管准确的将样品转移到小柱或贮液瓶中,样品必须以匹配固相萃取的形式存在。

  第四步:淋洗填料如果您的目标物被保留在填料上,使用与溶解样品相同的溶液,或另外一种不能洗脱目标化合物的溶液,去冲洗掉未保留的或不需要的物质。通常冲洗溶液不超过一个柱体积,固相萃取膜片需要5-10ml。

  第五步:洗脱目标物用少量能洗脱目标化合物的溶液(一般200微升-2ml,取决于柱管的大小,或者5ml-10ml,取决于膜片的大小)去清洗填料,但是要留下在清洗时未洗下的杂质。收集洗脱液为进一步的分析做准备。

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